無菌作基本技術

實驗進行前，無菌室及無菌作臺（laminar flow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70% ethanol擦拭無菌作抬面，并開啟無菌作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗作。
每次作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。
無菌作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其他實驗用品用完即應移出，以利于氣流之流通。實驗用品以70% ethanol擦拭后才帶入無菌作臺內。實驗作應在抬面之中央無菌區域，勿在邊緣之非無菌區域作。
小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方作實驗。
實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70% ethanol擦拭無菌作臺面。作間隔應讓無菌作臺運轉5-10分鐘后，再進行下一個細胞株之作。
工作人員應注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心作，并選擇適當等級之無菌作臺（至少Class II）。作過程中，應避免引起aerosol之產生，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等，并避免尖銳針頭之傷害等。
CO2培養箱：
1. 細胞培養是否需二氧化碳供應，依細胞培養基種類而異。
2. 若細胞培養基以碳酸鹽為pH緩沖系統，則需補充二氧化碳以達到緩沖作用，應培養細胞于二氧化碳環境下，例如使用二氧化碳培養箱（常用之比例為5% CO2,95% air），或是灌入適量二氧化碳至培養容器內，放入一般培養箱中培養即可。為使二氧化碳能夠流通，培養瓶（例如T-flask）放入二氧化碳培養箱時應松開瓶蓋，或使用透氣瓶蓋。取出觀察時，則關緊瓶蓋，以避免污染。
3. 若細胞培養基含有其他緩沖物質而不需二氧化碳供應，則放在一般培養箱中培養即可。
4. 培養箱內可放置水盤以維持適量之溼度，避免因培養基蒸發造成鹽類濃度之變化而影響細胞生長。
定期檢測下列項目：
1. 無菌作臺：注意airflow壓力，定期更換紫外線燈管、HEPA過濾膜及prefilter預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。
2. CO2培養箱：CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染。
3. CO2鋼瓶：CO2壓力
4. 恒溫水槽：定期換水

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標簽：無菌實驗操作

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